Desenvolupar mètodes fiables i estandarditzats per avaluar la susceptibilitat dels eixams de mosquits als insecticides és crucial per comprendre l'eficàcia dels nous ingredients o formulacions actius. Els mètodes per avaluar la susceptibilitat dels eixams de mosquits als insecticides o productes de contacte (com els que es promouen en programes de salut pública) estan ben establerts i estandarditzats. Tanmateix, els mètodes de prova per a insecticides volàtils o en aerosol utilitzats en productes domèstics són difícils d'implementar de manera efectiva. Basant-nos en les recomanacions de l'Organització Mundial de la Salut per a insecticides domèstics, vam desenvolupar un mètode estandarditzat i d'alt rendiment per avaluar productes en aerosol utilitzant mosquits en gàbia i un mètode de desinfecció eficaç realitzat en una cambra de prova de Peet-Grady (cambra de prova PG). Vam validar l'eficàcia d'aquest nou mètode utilitzant poblacions de mosquits Aedes i Anopheles resistents i susceptibles als insecticides. Una característica innovadora d'aquest mètode és la inclusió d'una cambra dirigida a les gàbies de mosquits, que permet l'avaluació quantitativa en temps real de les taxes de mortalitat de mosquits després de l'exposició a l'insecticida. La desinfecció amb hisop elimina eficaçment l'oli en aerosol que conté piretroides residual de la superfície de la cambra de prova, amb taxes de mortalitat inferiors al 2% per als mosquits susceptibles avaluats directament a la superfície de la cambra. No es va observar heterogeneïtat espacial en les taxes de mortalitat o mortalitat entre els mosquits en gàbia a la cambra PG. El nostre mètode de doble gàbia proporciona un rendiment vuit vegades superior al mètode de vol lliure, cosa que permet proves simultànies de diferents soques de mosquits i una discriminació eficaç entre poblacions de mosquits susceptibles i resistents provades en paral·lel.
Fins ara, els insecticides en aerosol s'han utilitzat principalment a la llar per a la protecció personal, amb un ús limitat en programes de salut pública. Tanmateix, estudis recents han demostrat un ús generalitzat d'insecticides domèstics en zones on prevalen les malalties transmeses per vectors. Tant si la motivació és el repel·lent de mosquits com la prevenció de malalties, hi ha una necessitat urgent de mètodes estandarditzats i fàcils d'utilitzar per a la detecció de poblacions de mosquits endèmics per a la susceptibilitat als insecticides domèstics. Això és crucial per predir l'eficàcia dels insecticides contra els vectors locals i entendre com l'ús d'insecticides domèstics influeix en la selecció evolutiva de la resistència als insecticides.
El mètode suplementari 1 proporciona instruccions detallades pas a pas per dur a terme el nostre programa de proves d'insecticides en aerosols.
Tot i que les directrius de l'OMS recomanen l'ús de nebulitzadors automatitzats, no proporcionen especificacions tècniques específiques. L'ús de nebulitzadors automatitzats és crucial, ja que la nebulització manual en una cambra de propilenglicol no només requereix molta mà d'obra, sinó que també pot causar inconsistències espacials i variacions en la durada de la nebulització.
La cambra de reacció s'ha d'esterilitzar després de cada prova, però el mètode de neteja interna recomanat a la guia de l'OMS consisteix a aplicar aigua amb una mànega. En la nostra feina diària, aquest mètode és el pas que requereix més mà d'obra en el funcionament dels equips bioanalítics, per la qual cosa vam desenvolupar i provar un procediment d'esterilització basat en hisops.
Les parts extraïbles del ventilador es tracten tal com s'ha descrit anteriorment, i les pales i el marc del ventilador es netegen amb una esponja amarada en una solució al 5% de Decon 90.
Basant-nos en la relació entre la durada de la polvorització i la velocitat d'administració del producte, el nostre dispensador d'aerosols també va demostrar una bona precisió en el control de la relació de dosi d'aerosols, almenys en el rang provat d'1 a 4 vegades. Com es mostra a la figura 3b, aquesta característica és particularment important per caracteritzar la relació dosi-resposta de noves formulacions d'aerosols o determinar la dosi d'identificació per detectar la resistència als insecticides.
Demostrem que el nostre protocol revisat per avaluar els insecticides en aerosol domèstics, mitjançant la desinfecció amb hisops, gàbies dobles, polvoritzadors controlats a distància i enregistrament biomètric de càmeres d'acció, és una alternativa més eficaç i viable a l'actual.OMSrecomanacions. El mètode de desinfecció amb hisop, que només requereix 20 minuts, estalvia significativament temps en comparació amb el protocol existent (que normalment requereix una hora per cambra de prova). També redueix el temps que els operadors dediquen a posar-se l'equip de protecció individual complet (per exemple, cascos respiratoris i roba de treball antiestàtica). A més, aquest mètode genera menys líquid i roba contaminats per al tractament que una neteja completa de la cambra de prova, minimitzant així el potencial de contaminació de la sala que allotja la cambra de prova. El mètode de desinfecció amb hisop també és adequat per a la desinfecció de sales de prova semipermanents que requereixenmínimCol·locació de mobles en diverses distribucions d'habitacions.
Una qüestió clau explorada en aquest estudi i en altres és l'estandardització de les dosis d'exposició als insecticides aplicats al medi ambient a través de diferents protocols de prova. Com es mostra a la Figura 2b, tot i una durada de polvorització fixa, el volum de polvorització variava segons els tipus d'aerosol, cosa que podria reflectir diferències en els processos de fabricació (per exemple, pressió interna, ús de propel·lent, estructura del broquet, etc.). A més, la manca actual de dispositius de polvorització remota disponibles comercialment amb la flexibilitat necessària en la durada de la polvorització limita el seu ús a l'hora d'avaluar la relació dosi-resposta per al control de mosquits. La polvorització manual a través de portes de prova o portes d'accés (si n'hi ha) pot provocar variacions en les dosis d'exposició. De fet, els nostres resultats destaquen la necessitat i la importància de reduir aquestes fonts de variació. Per a les poblacions resistents d'Aedes aegypti, vam observar una correlació entre la dosi d'aerosol i la determinació final de la susceptibilitat o resistència (Figura 3b). Idealment, les dosis d'aerosol s'haurien d'estandarditzar en grams de substància aerosolitzada en lloc de la durada de l'aerosolització per facilitar les comparacions entre diferents estudis.
L'RCAD ofereix un enfocament alternatiu per a futures investigacions que minimitza l'impacte de les variacions del procés. Tot i que vam descobrir que l'estandardització dels aerosols no és factible, vam demostrar que la massa d'aerosol administrada a través de diferents llaunes d'aerosol es pot estimar de manera reproduïble calibrant la longitud de polvorització (Figures 2b, 3a). Aquesta estandardització de la concentració d'aerosols en qualsevol cambra de prova és crucial per millorar la reproductibilitat dels resultats.
Basant-nos en la nostra experiència i la d'altres grups de recerca, les recomanacions que conté la Guia actual sobre l'ús de mètodes de detecció d'aerosols per a proves de mosquits de vol lliure plantegen reptes logístics importants per als estudis de laboratori i de semicamp. Per exemple, els mètodes de detecció de mosquits de vol lliure tenen un rendiment molt baix (inclosa la recaptura intensiva en mà d'obra dels mosquits de vol lliure supervivents) i pateixen diverses limitacions tècniques, com ara les dificultats per determinar les taxes de mortalitat en temps real.
Tot i que el nostre experiment validat de doble gàbia aborda el problema de les limitacions de flux i és un mètode factible per detectar la susceptibilitat dels mosquits als insecticides en aerosol, cal tenir en compte que les taxes de mortalitat dels mosquits de les Illes Caiman van ser significativament més baixes en l'experiment de la gàbia que en l'experiment de vol lliure (Fig. 5c, Taula 1). Aquesta diferència pot reflectir una reducció de la dosi d'insecticida dins de la gàbia, ja que menys gotes d'aerosol penetren a la malla i entren a la gàbia. Estudis futurs podrien utilitzar teixits de malla més gran i dissenys de gàbies amb taxes de flux d'aire de ventilador més elevades (per exemple, dissenys cilíndrics) per validar encara més els resultats obtinguts amb els diferents mètodes experimentals.
Data de publicació: 02-02-2026